發(fā)布時間 : 2020-06-17 閱讀次數(shù) : 163
做細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是常見的一個實(shí)驗(yàn).但是有很多人不是很得要領(lǐng),鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂.怎么辦呢？
細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán).然后從底部敲擊,使之分散.如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,建議用這個儀器稍振蕩一下,效果不錯,振幅小,頻率高.
一般96孔板,每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再繼續(xù)加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度（我一般輕巧敲三下）,太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時針旋轉(zhuǎn)（逆時針效果不好）,依次敲擊剩余三個邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱.
6孔板 12孔板或24孔板,均可采用將個孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動浸潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔一次類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細(xì)胞懸液會平鋪在整個孔底,加細(xì)胞懸液的時候可以避免加在中間,中間細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后會出現(xiàn)周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下.
細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個狀態(tài).離心后,要充分懸浮.還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,需要晃動,晃的時候zui好不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,就會不均勻.
一瓶細(xì)胞長滿后,正常處理,在培養(yǎng)瓶里吹勻,然后鋪6孔板,每孔2毫升,鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放到培養(yǎng)箱里,輕微的左右前后各三圈.基本上24小時之后再觀察,每孔的細(xì)胞都會很均勻.
計算好所需要的全部液體量和細(xì)胞量,混勻后,加到六孔板里,六孔板按橫8字型晃,顯微鏡下觀察,如果不均勻,按上述方法再晃.如果細(xì)胞未計數(shù)直接種的話,在種六孔板的過程中,隨時晃一下混勻用的瓶子.
放在水平板面上先上下移動,再左右移動,每個方向5到6次,但關(guān)鍵的是搖晃后zui好直接放入培養(yǎng)箱中,不要再做過多的運(yùn)動,例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去了.
